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人工诱导南方鲇雌核发育的最适参数


□ 吴风瑞 张修月 王德寿

  摘要:用紫外线照射南方鲇(Silurusmeridionalis)精子,用遗传失活的精子人工授精,采用热休克方法抑制南方,鲇第二极体的排出。根据热休克起始时间、持续时间和休克温度三因子三水平设计正交试验,探索获得人工诱导南方鲇雌核发育的最理想条件。结果表明,紫外线照射精子15 min,热休克起始时间为受精后5 min,持续时间为1 min,休克温度为41℃,对人工诱导南方鲇雌核发育最有利。该实验为进一步分析人工繁殖南方鲇的雌化机制以及南方鲇性别决定的分子机制奠定了基础。
  关键词:南方鲇;雌核发育;技术参数
  中图分类号:S965.117 文献标识码:A 文章编号:0250-3263(2006)01—27—05
  南方鲇(Silurus meridionalis)也称南方大口 鲇,是我国长江流域特产的重要经济鱼类,具有 肉质细嫩、味道鲜美、生长快、抗病力强、自然越 冬等经济状况与特点,深受广大消费者的喜 爱。
  野生环境中的南方鲇的性比约为1:1, 人工繁殖为全雌鱼苗。目前对南方鲇全雌 化的机制以及南方鲇性别决定的类型及分子机 制还不清楚。若以雌核发育的个体作亲鱼,人 工诱导雌核发育,就能获得遗传上完全相同的 纯合后代。通过药物诱导处理人工雌核发育的 雌鱼使其转化为生理雄性(XX,产生精子),再 进行兄妹配对,就能获得全雌性的纯系。通 过对正常繁殖后代、性逆转个体和雌核发育后 代杂交性比及有关基因的表达进行研究,对深 入分析南方鲇性别决定类型和人工繁殖后代的 雌化机制具有重要意义。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 试验鱼 2005年4月,在长江支流嘉陵江 下游合川(东经106°17′,北纬29°58′)至北碚 (东经106°27′,北纬29°51′)段收集野生健康且 性成熟的南方鲇雌雄亲鱼。
  1.2 采集精子和卵子 用人绒毛膜促性腺激 素(HCG)和鱼用促黄体释放激素类似物(LRH- A)混合注射法进行人工催产,注射剂量为雌鱼 6~8 IU/g,雄鱼2 IU/g。待发情时,将亲鱼捞 起,擦干体表并对其生殖孔用75%的酒精消 毒,挤出卵子(约50000粒并分为9份)于孵化 碗中,并将精液挤进培养皿中。
  1.3 筛选精子最佳照射时间 取精液约0.8 ml,分成4份加入到4个培养皿(各0.2 m1)中, 分别用Hanks溶液稀释(精液与Hanks溶液的 比例为1:4)并轻轻振荡以让精子均匀分散。 在暗室里将装有精子的培养皿放在冰块上,置 于紫外灯下(254 nm,3.3×10-4J/mm2)分别照 射10、15、20、25 min,再将处理后的每份精液分 成2份(总共8份),避光3 min后,取其中4份 (如表1,A11、A21、A31、A41)加入到装有卵子的 孵化碗中进行干法授精(各组授精温度均为 17℃),不进行温度休克,直接在24℃水中孵 化,作为精子遗传失活效果的质量控制(理论上 无一成活);另外4份(如表1,A12、A22、A32、 A42)加人到装有卵子的孵化碗里授精,授精5 min后放人40℃的恒温水浴锅中热休克2 min, 再放人24℃水中孵化。再取一份正常的精子 (如表1,A0)和卵子授精,不进行热休克直接于 24℃水温孵化,作为卵子的质量控制。设立9 个批次的试验(表1),供观察统计及计算。
  1.4 诱导极体雌核发育 根据热休克起始时 间、持续时间和休克温度三因子三水平设计正 交试验(表2)。由步骤1.3得出的最佳精子照 射时间作为本次试验精子的紫外照射时间进行 照射,然后与卵子在孵化碗中进行授精,并分别 在授精后1~3 min将受精卵迅速放进预先置 于39~41℃恒温水浴锅中的孵化网中进行热 休克,轻轻摆动以使受精卵受热均匀,热休克1 ~3 min后,取出受精卵并置于24℃进行孵化 (表2,试验组Xn,X=B,C,D,n=1~3)。设 立正常精子与卵子授精、不进行热休克的一组 为卵子质量控制组(表2,对照组1),另取最佳 照射时间处理的精子与卵子授精、不进行热休 克的一组为精子质量控制组(如表2,对照组 2)。
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