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苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究


□ 李海英 张 力 吴式琇 吴建波 韩义香

  摘要 目的:观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法:倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果:苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变:细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0/G1期比例明显增高,S期、G2/M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论:苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。
  关键词 苦参碱 人鼻咽癌CNE2细胞 增殖 周期 凋亡 实验研究
  
  鼻咽癌是我国南方及东南亚地区高发的恶性头颈部肿瘤,放射治疗是其主要的治疗方法,但由于放疗对靶细胞杀伤缺乏选择性及在疗效和毒副作用方面的剂量依赖性,鼻咽癌患者的5年生存率维持在50%左右[1]。需要寻找新的治疗药物与方法以提高鼻咽癌的治疗效果。
  苦参碱(MT)是中药苦参的主要有效成分,属于四环的喹诺里西啶类(quinolizidine),分子式为C15H24N2,具有抗病原体、抗炎症、抗肿瘤、抗心律失常等生物活性[2]。据动物实验研究及临床报道,其对多种肿瘤有防治作用,如消化道的肝癌、胃癌,神经系统的神经母细胞瘤、脑胶质瘤以及卵巢癌、白血病等[3]。本实验观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2增殖、细胞周期和凋亡方面的影响,探讨其对鼻咽癌可能的作用机制,以便为临床治疗鼻咽癌提供新的思路。
  1 材料
  1.1 细胞和试剂:人鼻咽癌细胞株CNE2购自湖南湘雅细胞中心,苦参碱购自西安市天园生物制剂厂,细胞培养基RPMI-1640购自GIBCO公司,胎牛血清购自杭州四季青公司,CCK-8购自日本同仁化学研究所,CycleTestplus DNA Reagent kit购自Biosciences公司, Annexin V-FITC/PI购自Caltag公司。
  1.2 主要仪器设备:倒置相差显微镜,德国Leica;酶标仪ELX-800,美国;流式细胞仪FACS Calibur,Becton Dickinson公司。
  2 方法
  2.1 细胞培养:人鼻咽癌细胞株CNE2贴壁培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中,置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养,每周换液2~3次,0.25 %胰酶(内含0.02 %EDTA)消化传代。 ......
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