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激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及对脐静脉内皮细胞功能的影响


□ 朱鹏立 阮景明 俞兆希 陈 慧 李体远

  [摘 要] 目的 构建激肽释放酶(HK)腺相关病毒(AAV)载体,检测重组病毒感染脐静脉内皮细胞系(HUVEC)后HK基因和内皮功能相关基因表达的变化。方法 HK基因克隆人腺相关病毒载体质粒pAAV-MCS,和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、腺病毒辅助质粒pHelper共转染293细胞,包装成带有HK基因的重组腺相关病毒(rAAV-HK)。以rAAV-HK感染HUVEC。RT-PCR法检测HK基因、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素B1受体以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA转录变化。ELISA法测定HUVEC上清液和胞内HK的含量。结果 成功构建了rAAV-HK。rAAV-HK感染HUVEC后,实验组胞内HKmRNA转录(0.59±0.1 2)比空白组(0.26±0.05)明显增加(P<0.01);实验组胞内HK含量(120.1±40.9)比空白组(30.8±12.8)显著升高(P<0.01);实验组eNOSmRNA转录(1.19±0.28)较空白组(0.66±0.11)增加(P<0.05),实验组caspase-3mRNA转录(0.30±0.25)较空白组(0.67±0.27)减弱(P<0.05)。VEGF、内皮素-1、内皮素B1受体、缓激肽B1受体、缓激肽B2受体mRNA转录两组差异无统计学意义。结论 rAAV-HK病毒感染HUVEC后能高效表达HK,并促进HUVEC胞内eNOSmRNA转录,抑制caspase-3mRNA转录。提示导入HK基因能够改善内皮功能。
  [关键词] 激肽释放酶类;依赖病毒;内皮,血管
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