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加减十灰散对急性肝功能衰竭大鼠血清内毒素和肿瘤坏死因子水平的影响


□ 欧阳钦王晓东

  关键词 加减十灰散 炭性中药 急性肝功能衰竭 内毒素 肿瘤坏死因子 大鼠
  
  本实验通过大鼠急性肝功能衰竭造模、加减十灰散灌胃,观察大鼠血循环中内毒素及肿瘤坏死因子水平的变化,以及观察肝组织病理切片改变情况,验证加减十灰散,尤其是其中炭性中药的疗效,为临床使用本方治疗急性肝功能衰竭患者提供实验依据。
  
  1 材料与方法
  1.1 材料:包括实验动物、实验药品及检测试剂等。
  1.1.1 实验动物: 90只雄性SD大鼠,平均体重200±8.2g,(购自浙江医学科学院实验动物中心),置室温(22±3)℃,湿度60%~75%,实验室适应环境3d后进行实验。
  1.1.2 实验药品:加减十灰散,本院制剂室制备。组成:棕榈炭、血余炭、藕节炭、茵陈、栀子、大黄、白茅根、茜草、蒲公英。其中炭性药物碾成极细粉末,其它药物煎水浓缩至适量。
  1.1.3 实验室检测:血清内毒素(ET)检测:ET试剂盒购自上海市临床检验中心,其测定采用鲎试验偶氮基质显色法[1]。肿瘤坏死因子(TNF-α)检测:TNF-α试剂盒购自北京东亚免疫技术研究所,其含量检测采用放免法。
  1.1.4 病理组织切片检查:采用中性福尔马林液固定制备SD大鼠肝脏的病理切片,HE染色光镜检查。
  1.2 方法:包括模型制作、分组用药及统计方法等。
  1.2.1 急性肝脏功能衰竭大鼠模型制作:氨基半乳糖(D-GalN)(购自重庆医科大学教研室,批号20050268),用前将其溶于无菌生理盐水中,用1mol/L NaOH调节PH至7.0,使最终浓度为10%,根据文献[2],以D-GalN 1.2g/kg 作为最佳中毒剂量,腹腔注射一次成模。
  1.2.2 动物分组及用药:实验大鼠随机分为5组:① 正常对照组(Ⅰ组)10只:系非造模大鼠,自由饮用饲料。其余80例均系D-GalN造模大鼠。② 肝衰竭模型组(Ⅱ组)20只:D-GalN造模24 h后眼眶采血检测ET及TNF-α,并剖杀制作病理切片,观察肝组织受损情况。③ 生理盐水组(Ⅲ组)20只:每只大鼠生理盐水4ml/次,2次/日灌胃。④ 加减十灰散组(Ⅳ组)20只:棕榈炭、血余炭、藕节炭等炭性中药各等份研成极细的粉末,每只大鼠1g,2次/日,以茵陈480g, 栀子、白茅根、茜草、蒲公英各240g,大黄120g,煎水2400ml,2~8℃冰箱保存,每只大鼠灌服4ml/次,2次/日,灌胃送服上述炭性粉末。⑤ 加减十灰散去炭性中药组(Ⅴ组)20只,取上述煎剂每只大鼠4ml/次,2次/日灌胃。以上Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组喂养7天后,均予眼眶采血检测ET及TNF-α,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组采血后剖杀取肝组织制作病理切片。 ......
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