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强光照和全黑暗条件下荒漠沙蜥视网膜内GAP-43表达的免疫组织化学


□ 司克媛 刘忠虎 刘重斌 孙兰弟 王芳春 梁桂霞 俞诗源 王子仁

  摘要:采用免疫组织化学技术研究了在强光照和全黑暗条件下荒漠沙蜥(Phrynocephalusprezewalskic)视网膜内生长相关蛋白GAP—43的表达变化。结果表明,在正常光照条件下,视网膜内GAP-43阳性表达部位主要存在于内网层;强光照条件下,GAP—43免疫染色部位主要出现在内网层、节细胞层和内核层的部分细胞核。在全黑暗条件下,在视纤维层和内网层呈阳性染色;提示视网膜在不同环境条件下GAP-43的不同定位,可能与其在相应的环境下参与不同的视觉功能有关。
  关键词:荒漠沙蜥;GAP-43;视网膜;免疫组化技术
  中图分类号:Q954—33 文献标识码:A 文章缔号:0250—3263(2006)01-108—05
  GAP-43是一种神经元特异性快速转运蛋 白,与神经的生长、发育和再生及突触的可塑性 有关。脊椎动物成体视网膜内GAP-43的分布 已有报道,有研究指出GAP-43在视网膜中的存 在可能与视觉信号传导过程中神经递质的释放 有关。
  视网膜是参与视觉活动的功能器官,由于 视觉活动的复杂性,决定了组成视网膜各种神 经元之间突触形成的复杂性和可塑性,研究动 物在不同环境条件下,视网膜内神经递质的释 放和突触联系变化过程中相关的特异蛋白分子 的时空表达变化,对了解视觉功能有一定意义。
  蜥蜴的视觉系统因为其特殊的视觉再生能 力,其视神经损伤后可以再生,但不能建立正 确的视网膜—顶盖投射,已成为神经发育生物学 家关注的热点。Rodger报道一种蜥蜴 (Ctenophorus ornatus)的视神经损伤后GAP-43 在视神经中的持续高表达与其再生后视觉不能 恢复有关。到目前为止,国内仅有对蜥蜴亚 目(Lacertillia)动物的视网膜结构做过一些形态 学的研究。为了了解动物在不同环境条件下 的视觉可塑性及变温类动物的视觉活动特点, 本研究在以前的工作基础上,对强光照及全 黑暗条件下荒漠沙蜥(Phrynocephalus prezewalskic)视网膜内GAP-43的表达进行了观 察,为视网膜内GAP-43在不同条件下参与视觉 活动的可能机制提供形态学依据。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 材料 荒漠沙蜥采自甘肃省武威地区民 勤境内腾格里沙漠边缘。实验用动物自野外捕 获后,置于实验室内饲养,驯化1周,然后挑选 15只(体重为5,59±0.50 g,吻肛长13.43± 0.89ca),随机分为A、B、C 3组,每组5只。A 组为正常对照组,光照强度50~100lx(HD8366 光照度计),光照周期为L12:D12;B组为强光 照组,光照由500W的钨卤素灯提供,光照强度 1 800~2 000lx,处理时间为1周,光照周期为 L12:D12;C组为全黑暗处理组,处理时间为1 周。各组动物分别于低温条件下(冰浴)快速摘 取整个眼球,在体视镜下剥离晶体后,固定于 Bouin’s液,4℃冰箱过夜,常规石蜡包埋,连续 切片(LeicaRM 2235),切片厚度5μm,选择过瞳 孔和眼杯直径的视网膜切面用于免疫组化染 色。 ......
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摘自:动物学杂志
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