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补肾益智方对老年性痴呆大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的影响


□ 代建峰 高建青 方三华

  摘要 目的:比较补肾益智方与多奈哌齐对老年性痴呆大鼠的治疗作用,观察中药对老年性痴呆大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的影响,探讨中药治疗老年性痴呆的机理。方法:在老年大鼠海马内注射凝聚态Aβ1-42,建立老年性痴呆大鼠模型,并观察药物对该大鼠模型的学习记忆能力、海马CA1区锥体细胞的形态及数量的影响。结果:①补肾益智方、多奈哌齐可以改善老年性痴呆大鼠学习记忆能力。②补肾益智方有减轻缺血对海马CA1区锥体细胞损伤的作用。结论:①中药补肾益智方为治疗老年性痴呆大鼠的有效方;②补肾益智方治疗老年性痴呆大鼠的机理可能与减轻大鼠海马CA1区椎体细胞的损伤有关。
  
  关键词 补肾益智方 老年性痴呆 海马 CAI锥体细胞 大鼠
  
  老年性痴呆(Alzheimer disease,AD)是一种以进行性智能减退为主要特征的老年神经系统退行性疾病,以记忆、感觉、运动、语言功能减退,人格和行为改变为特征。中医学对该病有独到的理论认识和丰富的治疗方法,在临床治疗中有较好的疗效。补肾填精法、活血祛瘀法、涤痰开窍法是中医临床治疗AD的常用方法
  [1]。由于AD病程长,症状变化多,临床不少采用专方治疗,笔者将常用三种治法的方药组成补肾益智方对老年性痴呆大鼠进行治疗,并以多奈哌齐作为西药对照药物,观察两组药物对AD大鼠的跳台实验和脑组织海马CA1区锥体细胞的影响,探讨中药治疗AD的机理。
  1 材料与方法
  1.1 材料:清洁级健康成年雄性SD大鼠60只,鼠龄23~26个月,体重450±30g。由浙江大学实验动物中心提供并饲养。实验药品:本实验中药制剂由浙江省中医院制剂室制备提供。补肾益智方组成:仙灵脾、制首乌各15g,红参、益智仁、熟地、丹参、当归、郁金、半夏、菖蒲、远志各10g。以上中药水制剂每毫升相当于生药1.6g。多奈哌齐胶囊[卫材(中国苏州)制药有限公司,批号19002],规格5mg/粒。
  1.2 方法:分述如下。
  1.2.1 老年性痴呆动物模型的制备:参照徐意
  [2]造模法,将Aβ1-42干粉剂溶于无菌生理盐水(2g/L),在37°C保温箱孵育1周,使其变为凝聚态Aβ。大鼠经腹腔注射10%的水合氯醛麻醉后,将凝聚态Aβ注入大鼠双侧海马,制成老年性痴呆大鼠模型。
  1.2.2 实验分组:将老年性痴呆大鼠分为模型组、中药组、多奈哌齐组,并设正常组共4组进行实验。每组15只。
  1.2.3 实验用药:中药组药物用量参照第5版《中药学》标准,按煎煮标准配制,以其临床用量的6倍作为实验大鼠的用药量,分别灌胃给药。正常组:每天给予纯净水灌胃,3ml/次;模型组:每天给予纯净水灌胃,3ml/次;中药组按生药1.2g/100g体重比例用药;多奈哌齐组:每天给予多奈哌齐胶囊水溶液灌胃,按0.5mg/kg体重给药。动物造模后第3天开始给药,每天1次,连续用药60天。
  1.2.4 观察指标:①观察大鼠学习记忆能力:根据大鼠在遭受电击后跳上橡皮垫所需的时间作为大鼠的学习成绩进行评估,在大鼠造模前及造模后第59天及60天进行跳台试验,记录大鼠在遭受电击(60~80V)后跳上橡皮垫所需的时间(本实验没有观察错误次数,仅采用潜伏期一个指标,因为预实验期间发现所有大鼠在15分钟内极少有错误次数发生),正常组进行同样的试验。进行前后24小时两次比较,作为记忆保持能力的评估。②组织形态学检查:第60天处死大鼠,取大鼠脑组织标本进行海马CA1区锥体细胞形态学检查。动物断头处死后,立即取大鼠脑组织用4%甲醛溶液固定,经透明,脱水,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察。③组织切片定量分析:采用单盲法,每组选择5张不同断面的切片,这些切片在各组间保持相同。用图象分析仪分别对海马CA1区进行处理,测量单位面积细胞数目。
  1.2.5 统计学处理:统计描述:计量资料均以均数±标准差(x±s)表示,统计推断:计量资料多组均数比较用F检验,其中两两比较用q检验,检验其差异显著性,均以P<0.05或P<0.01为其差异显著性的标准。所有数据均采用SPSS10.0统计软件包进行统计。
  2 结果
  2.1 药物治疗对大鼠学习成绩的影响:结果见表1。跳台是评价动物学习记忆能力的实验装置,根据大鼠在遭受电击后跳上平台所需时间作为大鼠学习成绩进行评估。24小时后重新试验可以反映大鼠对电击回避记忆的保持能力。实验证明模型组大鼠造模后跳上平台所需时间显著延长(P<0.01)证明模型组大鼠出现了明显的学习记忆功能障碍。中药组及多奈哌齐组与模型组比较皆有显著性差异(P<0.05)说明两组药物都有改善大鼠学习记忆功能的趋势。两治疗组间比较无显著性差异(P>0.05)。
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