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血管活性肠肽参与银杏叶提取物对结肠运动的抑制作用


□ 杜 鹃 唐 影 高 莉 柯道平 孔德虎

  摘要 目的:探讨银杏叶提取物(EGb)对大鼠离体结肠运动的影响及其相关机制。方法:应用离体结肠灌流实验,观察不同浓度的EGb对大鼠离体结肠运动的影响;利用放射免疫分析的方法检测EGb灌胃后大鼠远端结肠和血浆中血管活性肠肽(VIP)含量的变化。结果:在平滑肌浴槽内加入EGb 0.5~50.0mg/L 0.1ml,可使大鼠离体结肠运动出现抑制和兴奋两种不同反应,其中以抑制作用为主,且以10.0mg/L作用最强;VIP1mmol/L可使离体结肠运动受到抑制,再加入EGb10mg/L 0.1ml后,VIP组收缩幅度和张力进一步降低(P<0.05)。EGb10ml/kg灌胃后,放射免疫分析法结果显示,远端结肠组织中VIP的含量明显增加(P<0.05),但血浆中VIP含量没有显著变化。结论:VIP可能通过旁分泌或神经分泌以局部激素或神经递质的方式参与EGb对结肠运动的抑制作用。
  关键词 银杏叶提取物 结肠运动 血管活性肠肽 大鼠
  
    基金项目:安徽省高等学校省级自然科学基金资助项目血管活性肽参与银杏叶提取物对结肠运动的抑制作用,编号:NO.KJ2008B292银杏叶提取物含有黄酮苷和萜内酯等多种生物活性物质,是一种作用广泛、药效可靠、不良反应较少的天然药物。我们以前的实验发现,EGb对豚鼠单个结肠平滑肌细胞具有舒张作用,能够拮抗乙酰胆碱(ACh)引起的结肠平滑肌细胞强直性收缩[1]。本实验通过大鼠离体结肠的灌流实验,观察不同浓度的EGb对大鼠离体结肠运动的影响,并利用放射免疫分析方法检测EGb对大鼠血浆和远端结肠中血管活性肠肽含量的影响,初步探讨EGb影响大鼠结肠运动的机制。
  1 实验材料
  1.1 动物:雄性Wistar大鼠16只,体重200~250g,由安徽医科大学实验动物中心提供。
  1.2 药物与试剂:银杏叶提取物(黄酮苷>24%,萜类内酯>6%)由安徽医科大学药理教研室提供;VIP放射免疫试剂盒购自北京海科锐生物技术中心。
  1.3 实验仪器:HSS-1(B)数字式超级恒温浴槽(成都仪器厂),张力换能器(北京航天医学工程研究所)、BL-410生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)。
  2 实验方法
  2.1 离体结肠灌流实验[2]:实验前大鼠禁食18h,自由饮水。脱颈椎致死,剖开腹腔,取远端结肠2cm,在盛有Krebs液的培养皿中漂洗,去除肠内容物,随后用手术线将肠管两侧打结扎紧,置于容量为40ml恒温37±0.5℃离体器官灌流浴槽中,以95%O2和5%CO2充分饱和、pH 7.4±0.5的Krebs液持续恒速(5ml/min)灌流。Krebs液的成分(mmol/L)为:NaCl 114.0;KCl 4.7;MgCl2 1.2;CaCl22.5;NaH2PO4 1.8;Glucose 11.5;NaHCO3 18.0。肠管标本一端固定于浴槽底部,另一端连于张力换能器并引至计算机接口,由BL-410生物机能实验系统记录纵行肌收缩活动。肠管在1g前负荷下温育,待稳定后给药。给药采用分离加入的方法,即给药5 min后用37℃的Krebs液多次冲洗,待肠管运动稳定后再加入另一种药。以给药前5min的平均值作为对照值,以给药后5min的平均值作为效应值;分别记录给药前后肠平滑肌的收缩幅度和张力,并换算成变化百分率。变化百分率=(效应值-对照值)/对照值×100%,负值为抑制效应,正值为兴奋效应。 ......
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