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苦参碱对海马神经中枢抑制作用的研究


□ 王绪平 陈继平 章建民 陆建荣

  摘要 目的:观察苦参碱海马神经中枢抑制作用。方法:采用离体大鼠、小鼠的海马区诱发场电位技术及HPLC分析技术观察苦参碱对大鼠、小鼠海马神经中枢的作用。结果:离体大鼠海马区诱发场电位实验结果显示,苦参碱能够剂量依赖性地抑制青霉素钠诱导的神经元顺向信号传导激活过程,使大鼠海马细胞外记录到的场电位各个参数发生相应改变。HPLC分析技术观察苦参碱对小鼠海马氨基酸神经递质的作用结果显示,苦参碱对小鼠海马神经大剂量(58.5mg/kg)在给药20min后γ-氨基丁酸(GABA)含量明显增加,与空白组比较有显著差异(P<0.05);苦参碱中剂量(39mg/kg)、苦参碱小剂量(19.8mg/kg)在给药40min后GABA含量与空白组含量比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。苦参碱各剂量组小鼠脑海马内Glu含量与空白组Glu含量比较,无明显差异。结论:苦参碱对海马神经中枢有一定的抑制作用,可能通过增加γ-氨基丁酸含量而发挥其中枢抑制作用。
  关键词 苦参碱 海马神经中枢 诱发场电位 氨基酸 实验研究
  
  苦参碱(MAtrine)是豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait.)、苦豆子(S.Alopecuroides L.)、广豆根(S.subprostrata Chun et T.Chen)等中草药的活性成分[1]。据大量文献报道,苦参碱在中枢神经系统、心血管系统、抗病毒、抗炎、免疫及抗肿瘤抗纤维化等方面具有重要的药理活性和应用前途[2]。近年来国内外在研究苦参碱的过程中,进一步发现了其多方面的药理作用,具有很大的再开发价值。本文在中药苦参醇提取液镇静催眠药理学实验基础上,进行了苦参碱对海马神经中枢的作用研究。
  
  1 材料
  
  1.1 实验动物:健康ICR小鼠20±2g,健康SD大鼠200±20g,雌雄兼用,由浙江省中医药研究院动物房提供,浙动字医第22-9601009号。
  1.2 药品及试剂:苦参碱购于中国药品生物制品检定所(批号:734-8701);注射用青霉素钠购于石家庄制药集团有限公司(批号:010353);戊巴比妥钠、醋酸钠、氯化钠、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、葡萄糖均购于中国生物制品有限公司;Pontamine sky blue(Chicago sky blue 6B)购于Sigma、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)标准品、异硫氰酸苯酯(PITC)、三乙胺,均为Sigma公司产品。苦参碱注射液,由珠海经济特区生物化学制药厂提供,批号:用药准字H20040593,规格,50mg/支,人用量1日3次。
  1.3 仪器:室温预孵槽、界面式记录槽、高阻微电极放大器(FD223.WPI. Inc. USA)、直流前置放大器(FZG-81型,上海嘉龙仪器厂)、示波器(COS5020. Kikusui. Japan)、Power Lab(AD. Inc. Australia)、SCSI总线控制卡、冷光源(上海医用光学仪器厂)、 恒流泵(B-2.上海统一生化仪器厂)、Chopper切片机、刺激器(上海国泰仪器厂)、刺激隔离器(A360. WPI. Inc. USA)、微操纵器(DR3001.WPI. Inc. USA)、恒温控制器(XMTA201)、Micro-Tech Scientific Inc.HPLC高效液相色谱仪。
  
  2 方法与结果
  
  2.1 苦参碱对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区场电位PS的影响[3-4]:大鼠清醒状态下断头,迅速剥离出海马,在切片台上切成500μm厚的脑片放入预先通以95%O2和5%CO2混合气的ACSF中(pH为7.35),室温下孵育1~2小时。采用界面式孵育槽,记录电极插入海马CA1区诱发场电位,刺激电极置Schaffer侧支处,诱发的场电位经生物信号分析系统转换至计算机进行观察、记录。采用灌流给药方式,正常对照组脑片稳定记录15~20min,仍一直采用正常脑脊液ACSF灌流;给药组脑片稳定记录15~20min后改为含1000kU/L的Penicillin Sodium的ACSFI液灌流10min,然后药物灌流30min;模型组脑片稳定记录15~20min,改为Penicillin Sodium灌流10min,然后正常ACSF灌流30min。记录各组诱发场电位个数及幅度变化,观察苦参碱对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区场电位PS的影响。
  实验结果见表1。结果表明:青霉素1000kU/L使海马脑片CA1区诱发场电位个数及幅度增加,提示青霉素钠能诱发脑片高兴奋性。0.1g/L、0.05g/L的苦参碱均能使青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片PS个数下降,与青霉素模型组比较有非常显著差异(P<0.05或P<0.01)。0.1g/L的苦参碱能降低PS的幅度,与青霉素模型组比较有显著差异(P<0.05),表明苦参碱对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区PS有抑制作用。
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