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三叶青的组织培养与快速繁殖研究


□ 钟毓倩

  关键词 三叶青 组织培养 快速繁殖
  三叶青又名有角乌蔹莓、石老鼠,为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤。主要分布于长江以南地区,但多年来三叶青被毁灭性挖取,种源稀少。笔者应用组织培养进行快速繁殖研究,以期解决资源紧缺问题。
  
  1材料
  
  1.1药材:试验材料采自安徽省,外植体取茎尖、带腋芽的茎段和叶片。
  1.2培养基:基本培养基为M S按不同处理方案添加不同类型的植物激素,用0.1N NaOH和0.1N HCL调节pH值为5.8~6.0,在高压灭菌锅中高温(121℃)灭菌20min。上述培养基均加3%蔗糖、1%琼脂,培养室温度25℃左右,每天光照13h,光照强度2000 1x左右。移栽基质经过灭菌消毒处理,按m(珍珠岩):m(草炭):m(菜园土)=1∶1∶1比例混合。
  
  2试验方法与结果
  
  2.1样品处理:取茎尖、茎段(带芽)和叶为外植体,按下列程序进行消毒:
  取材→自来水粗洗→5%洗衣粉水溶液漂洗5min→自来水冲洗30min→75%乙醇擦洗表面→0.1%升汞溶液中消毒5min→2%次氯酸钠溶液中消毒20min→无菌水冲洗4~6次,然后在无菌工作台中将外植体切成0.5~1.0cm长的小段。
  2.2诱芽培养:分别将不同部位的外植体接种到表1各培养基中,观察出芽情况,计算诱芽率。
  不同植体对愈伤组织诱导不一样,在由3号培养基的激素浓度配比下试验结果(见表2)。
  2.3继代增殖:将诱导出来的愈伤组织及芽丛转到新的3种不同激素组合的培养基上进行继代培养。将初代培养的芽丛分离并切割成2cm的茎段,接种于培养基MS+NAA 0.2;MS+6BA 0.02+NAA 0.5;MS+6BA 2+NAA 0.2。接种后给予全天光照,室温20~28℃。1周后腋芽萌动且萌蘖生长很快。
  2.4生根培养:不同激素组合对其生根状况影响较大(表4)。将诱导成活的丛生芽切割成单芽,分别转接到表3各培养基中(每瓶接1个芽),30 d后4号培养基的生根率最高达74%。
  2.5移栽定植:芽长到3~4cm时,切取健壮的植株转到生根培养基上,所有的植株都能正常生长,培养1周后,即诱导出根,10d后每株可长出3~5条根,根长达4~5cm。再培养1周,植株健壮,叶色浓绿,然后揭去纸盖练苗。轻轻洗去根部培养基,移到蛭石的小盆中,盖上塑料膜及烧杯,保持较高的温度,10d后揭去塑料膜及烧杯,可移栽到大田,小苗成活率95%。
  
  3小结
  
  对三叶青不同部位的外植体进行诱导,在相同消毒处理下和同种培养基中,最佳诱导外植体为茎尖。初代培养过程中以3号培养基为最佳,生根培养基以4号为最佳。6BA在三叶青的继代培养中的作用可以忽略不计,可以认为MS+NAA 0.2是最佳组合的继代增殖培养基。 ......
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