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□ 张红玉 戴关海 马 翠 杨 锋

  关键词 铁皮石斛多糖 S180肉瘤 抑瘤率 免疫功能 小鼠
  
  铁皮石斛(Dendrobium Candidum Wall.ex Lindl.)为常用贵重药材,它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效[1]。其主要有效成分为石斛类多糖及生物碱,另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。现代药理研究报导石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、降低血糖等作用,但对荷瘤动物免疫功能的作用报导甚少。本文以S180肉瘤小鼠为动物模型,探讨了铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠的免疫调节作用,现将结果报告如下。
  
  1 实验材料
  
  1.1 动物及瘤株:
  ICR小鼠:雌雄兼备,体重18~22g,70只,由浙江省中医药研究院动物房提供,许可证:SYXK(浙2004-0034);S180肉瘤、YAC-1细胞株均由中国科学院上海药物研究所肿瘤室提供。
  1.2 药物:
  铁皮石斛多糖:根据文献报道提取[2],实验提取的粗多糖得率为12.8%;别直参:由杭州临安市医药药材有限公司提供,实验时切片水煎三次,煎液浓缩成1g生药/ml浓度;注射用环磷酰胺(CTX):200mg/瓶,江苏恒瑞医药股份有限公司生产,批号07070421。
  1.3 试剂:
  刀豆蛋白素(ConA):250mg/瓶,由美国Sigma公司产,分装成1mg/ml,-20℃存放;RPMI-1640完全培养液:日本产;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR):中国科学院上海原子核研究所生产,浓度1mCi/ml,比度42Ci/mM。
  1.4 主要仪器:
  CO2培养箱:美国Forna Scientific公司产;DYQ-OII型多头细胞样品收集器:绍兴坡塘机械厂生产;YJ-875SA医用净化工作台:江苏吴江净化设备总厂生产;液体闪烁计数仪:型号Packard Tricard 300,美国产。
  
  2 方法
  
  2.1 铁皮石斛多糖对S180肉瘤生长抑制作用的影响[3]
  在无菌条件下,取生长良好的S180肉瘤匀浆制作1∶3稀释的细胞悬液,每鼠腋窝皮下注入0.2ml,次日随机分组,每组10只,称重,编号。分组如下:铁皮石斛多糖低剂量组(400mg/kg,以下简称低剂组)、铁皮石斛多糖中剂量组(800mg/kg,以下简称中剂组)、铁皮石斛多糖高剂量组(1600mg/kg,以下简称高剂组)、别直参对照组(2.2g/kg,以下简称对照1组)、环磷酰胺对照组(30mg/kg×3d,以下简称对照2组)与模型对照组(以下简称模型组)。除CTX组在第3、5、7天腹腔注射,各组动物每日灌胃相应药液1次,连续10日。于停药次日称体重,处死小鼠,取瘤块,称瘤重,计算肿瘤抑制率。
  2.2 铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响:
  分述如下。
  2.2.1 对T淋巴细胞转化功能及NK细胞活性的影响:动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前,实验同时设正常组(ICR小鼠10只)。停药次日,脱颈椎法处死小鼠,无菌取脾脏。T淋巴细胞转化功能采用刀豆蛋白(ConA)诱导的3H-TdR掺入法测定,NK细胞活性采用小鼠淋巴瘤细胞(YAC-1)为靶细胞的3H-TdR前标法测定。
  2.2.2 对巨噬细胞吞噬功能的影响:动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前。终止给药前3天每鼠腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液0.5ml,4天后,每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5 ml,待12小时后,颈椎脱臼处死小鼠,再腹腔注射Hank’s液2ml,轻揉小鼠腹部1min。然后打开腹部吸出腹腔洗液lml,滴于载玻片上,放在垫有湿纱布的塘瓷盆内,37℃孵育30min,以生理盐水漂洗,除去未贴片细胞,晾干,1∶1丙酮-甲醇溶液固定,Giemsa-PBS染色。分别计算吞噬百分率和吞噬指数[4]
  2.2.3 对溶血素值的影响[5]:动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前,给药第8天腹腔注射2%绵羊红细胞,实验第12天小鼠眼眶取血,分离血清,测定溶血素值。结果用半数溶血值(HC50)表示。
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