互联网 qkzz.net
全刊杂志网:首页 > 医药医学 > 文章正文
刊社推荐

青心酮对缺氧诱导的人脐静脉内皮细胞NF-κB、COX2表达的影响


□ 黄艳君 刘小利 周 洁 黄引平

  摘要 目的:研究青心酮对缺氧诱导的人脐静脉内皮细胞NF-κB、COX2表达的影响。方法:采用人脐静脉内皮细胞ECV304细胞株,将其放入含95%N2、5%CO2混合气体的缺氧环境,制备缺氧损伤模型。实验设正常组、缺氧组、青心酮组,免疫印迹法检测IκBα、COX2蛋白的表达。结果:与正常组相比,缺氧组IκBα蛋白的表达量显著降低(P<0.01),COX2蛋白的表达量显著升高(P<0.01)。与缺氧组相比,青心酮组IκBα蛋白的表达量显著升高(P<0.01),COX2蛋白的表达量显著降低(P<0.01)。结论:青心酮抑制缺氧诱导的人脐静脉内皮细胞NF-kB、COX2表达,可能对血管内皮细胞缺血缺氧损伤具有一定的保护作用。
  关键词 青心酮 脐静脉内皮细胞 核因子κB(NF-κB) 环加氧酶2(COX2)
  
  妊娠期高血压疾病患者全身小动脉痉挛,各组织器官因缺血缺氧受到损伤,并可引起子痫等一系列严重并发症[1]。青心酮,又名3,4-二羟基苯乙酮,是从秃毛冬青叶中提取的有效成分,临床将其用于治疗妊娠期高血压疾病取得良好疗效[2],但其机制尚未完全阐明。本实验采用人脐静脉内皮细胞缺氧模型,观察青心酮对核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)、环加氧酶2(Cyclooxygenase-2,COX2)表达的影响,从分子水平探讨青心酮对血管缺血缺氧损伤的保护作用。
  
  1 材料和方法
  1.1 主要试剂:RPMI 1640培养基购自GIBCO公司。胎牛血清购自三利生物制品厂。BCA蛋白浓度测定试剂盒、增强化学发光试剂(ECL)购自Pierce公司。IκB、COX2多克隆抗体购自Santa Cruz公司。辣根过氧化物酶标记的二抗由武汉凌飞科技有限公司提供。
  1.2 细胞培养及实验分组:ECV304细胞用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的RPMI 1640培养液,于37℃、95%空气和5%CO2环境中培养,隔天换液,每4天用0.25%胰酶消化传代1次。实验当天细胞密度达到70%~80%时更换新鲜培养液,再将其分为3组:①正常组:放入含95%空气、5%CO2的培养箱内(常氧条件);②缺氧组:放入含95%N2、5%CO2的培养箱内(缺氧条件);③青心酮组:加入10-5mol/L DHAP,其余培养条件同缺氧组。每组设6个平行孔,培养24小时后进行各项检测。
  1.3 免疫印迹法检测IκBα、COX2蛋白表达:3组细胞分别用细胞裂解液提取总蛋白,BCA法测定蛋白浓度。取80μg总蛋白样品煮沸变性后,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳,随后电转移至硝酸纤维素膜上,置于5%脱脂奶粉中室温封闭1h。加入1∶200稀释的一抗中4℃孵育过夜,TBSI(TBS+0.05%Tween-20)洗膜,置1∶8000稀释的辣根过氧化物酶标记的二抗中37℃孵育1h,TBST洗膜。将膜与ECL反应5min后,曝光于X光胶片上,显影、定影,扫描后图像分析。
  1.4 统计学分析:采用SPSS13.0软件进行统计学处理,实验数据用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析。
  
  2 结果
  2.1 IκBα的表达:各组IκBα蛋白表达量分别为:正常组692.68±46.18,缺氧组124.27±12.50,青心酮组257.51±27.23。与正常组相比,缺氧组IκBα蛋白的表达量显著降低(P<0.01),而青心酮组IκBα蛋白表达较缺氧组增加(P<0.01)。
  2.2 COX2蛋白的表达:各组COX2蛋白表达量分别为:正常组107.25±15.99,缺氧组429.47±37.53,青心酮组238.41±22.53。与正常组相比,缺氧组COX2蛋白的表达量显著升高(P<0.01),而青心酮组COX2蛋白表达较缺氧组降低(P<0.01)。
分享:
 
分享:
 
精彩图文
关键字
支持中国杂志产业发展,请购买、订阅纸质杂志,欢迎杂志社提供过刊、样刊及电子版。
关于我们 | 网站声明 | 刊社管理 | 网站地图 | 联系方式 | 中图分类法 | RSS 2.0订阅 | EMS快递查询
全刊杂志赏析网 2016