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针药结合对乳腺增生大鼠乳腺组织及雌激素受体亚型表达的影响


□ 刘丽军 杜惠兰 靳亚慈 陈景伟

针药结合对乳腺增生大鼠乳腺组织及雌激素受体亚型表达的影响
刘丽军 杜惠兰 靳亚慈 陈景伟

[摘要] 目的:研究针药结合对大鼠乳腺增生病模型的抑制作用及作用机制。方法:复制乳腺增生病模型,造模后随机分为针刺组、中药组、针药组、对照组、模型组,除正常组、模型组外,其他治疗组分别行针刺、中药、针药结合及西药三苯氧胺治疗。每日治疗1次,9次一疗程,治疗3个疗程(30天)。观察乳腺组织的形态变化,测定腺泡腔直径及面积,免疫组化检测雌激素受体亚型(ERa、ERβ的表达。结果:模型组腺泡腔直径及面积均较正常组增大(均P<0.01);治疗组腺泡腔直径及面积均较模型组减小(P<0.05,P<0.01);针刺和中药可上调ERβ、下调ERa表达。结论:针刺和中药均对大鼠乳腺增生有抑制作用,针药结合的抑制作用最强,基本接近三苯氧胺水平,其治疗机制可能与上调ERβ、下调ERa表达有关。
[主题词]针药并用;纤维囊性病,乳腺/针灸疗法;纤维囊性病,乳腺/中医药疗法;基因表达;乳房/代谢;乳房/病理学

乳腺增生病是女性常见病,近年来发病呈上升趋势,有一定的致癌倾向[1],西医多采用激素内分泌治疗方法,虽有一定疗效,但副作用大,易复发。笔者在总结多年临床经验的基础上,以行气活血、软坚散结为基本治法的消癥散结汤结合针刺治疗乳腺增生病,经过临床应用观察,发现具有止痛快、软化缩小肿块等肯定疗效。为了探讨针药结合对乳腺增生病干预作用机理,本研究选用苯甲酸雌二醇长期大剂量给药复制大鼠乳腺增生模型,观察中药和针刺对大鼠乳腺增生病的抑制作用及机制,为临床针药结合治疗乳腺增生病提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料
1.1.1 实验动物
选用雌性健康未孕Wistar大鼠72只,体重(180±20)g,由河北医科大学实验动物中心提供(动物合格证号:602090)。

1.1.2实验用药及试剂
消癥散结汤由柴胡、郁金、赤芍、川楝子、丹皮、夏枯草、牡蛎等组成。采用传统煎煮方法,浓缩成水煎剂至每毫升含生药约2.75克,放置4℃冰箱保存。
苯甲酸雌二醇注射液(批号:0402281)、黄体酮注射液(批号:0508241)、三苯氧胺片(批号:060101)。抗体雌激素受体亚型(ERβ、ERa)购自NeoMarKers公司,PV-6001试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法
1.2.1 动物分组
动物适应性饲养1w后,按随机数字表法将其分为6组,每组12只。即正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、针刺治疗组(简称针刺组)、中药治疗组(简称中药组)、针刺加中药治疗组(简称针药组)、三苯氧胺治疗组(简称对照组),每组12只。

1.2.2造模方法
采用外源性雌激素长期刺激建立乳腺增生病病理模型[2]。正常组每天腹腔注射生理盐水0.2mL,其余各组动物均每天腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg,25d后改为每天腹腔注射黄体酮4mg/kg,连续5d。然后继续进行再分组实验。


1.2.3 治疗方法
于造模第31天开始,针刺组:根据《大鼠穴位图谱》[3]结合人体穴位,选取“屋翳”“合谷”“膻中”“足三里”针刺,留针5分钟,每日治疗1次,9次为一疗程,疗程间休息1d,治疗3个疗程,共30日;中药组:按25g/kg(相当于成人剂量的10倍)给予灌胃,每日1次,连用30d;对照组:每天给予三苯氧胺1.8mg/kg,相当于临床等效剂量,连用30d;针药组:针刺取穴操作同针刺组,同时灌服中药,剂量同中药组,连用30d;其他两组给予同体积的蒸馏水。

1.2.4观察项目及方法
(1)实验动物乳房直径的测量
于实验结束后,用游标卡尺测量各组大鼠第2对乳房直径。
(2)组织形态学观察
实验结束后,将各组大鼠分别立即断头处死,切取第2对乳房,甲醛液固定,石蜡包埋,HE染色,光镜观察乳腺组织形态学变化。应用日本Nikon E800显微镜下进行观察,美国IPP(Image-proplus)分析软件进行图像分析,每个切片采集3个高倍视野,测定腺体直径及面积并做出均值。
(3)ERa、ERβ免疫组化染色
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