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葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响


□ 谢月英 孙爱华 蒋锦琴

  摘要 目的:探讨葛根素对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分空白对照组和葛根素组。葛根素组采用MTT法,观察12h、24h、48h和72h后GMcs的增殖水平。结果:随着葛根素浓度的提高及作用时间的延长,GMCs细胞的生长抑制率呈现上升趋势。结论:葛根素能抑制GMCs增殖,并与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。
  
  关键词 葛根素 大鼠 肾小球系膜细胞 增殖
  
  肾小球系膜细胞增殖和系膜基质蓄积是大多数肾小球疾病发生、发展的共同病理表现,最终可导致肾小球硬化和肾间质纤维化[1]。临床上用于治疗肾脏疾病的许多药物都有抑制GMCs的增殖作用。
  葛根素(Pue)是从豆科葛属植物野葛的干燥根中提取并分离出来的一种单体,具有扩张血管、降血脂、降血压、改善微循环、抗氧化等药理作用。本研究通过体外细胞培养,观察葛根素对大鼠肾小球系膜细胞GMCs增殖的影响,为临床应用提供科学依据。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 材料:大鼠肾小球系膜细胞GMCs由武汉大学提供,胎牛血清及MEM培养液购自GIBCO公司。
  1.2 细胞培养:大鼠肾小球系膜细胞株用含体积分数为10%胎牛血清的MEM培养基,于37℃,5%CO2饱和湿度条件下培养,2~3天传代1次。
  1.3 实验分组:实验分空白对照组和用药组(Pue组),Pue组的Pue终浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、3mg/ml和3.5mg/ml,每个浓度重复3孔。
  1.4 MTT法测定GMCs的增殖水平:取对数生长期细胞使其脱壁,用10%胎牛血清MEN培养液重悬成单细胞悬液。以1×103/孔密度将GMCs细胞接种于96孔细胞培养板,用含10%胎牛血清的MEM培养液培养24h后,弃去原有细胞培养液,加入用培养液稀释的葛根素各200ul,对照组只加含10%胎牛血清的MEM培养液,在培养12h、24h、48h和72h后,每孔加入5mg/mlMTT溶液20ul,继续培养4h后终止培养,小心吸弃孔内上清液,每孔加入DMSO150ul,震荡混合仪震荡10min,使结晶充分溶解,选择490nm波长酶标分析仪测定每孔光吸收值(OD值)。
  
  2 结果
  
  将GMCs细胞与不同浓度葛根素共培养后,用MTT法测定OD值,结果见表1。
  
  3 讨论
  
  肾小球系膜细胞GMCs常作为体外研究肾脏病变发生机制和药物疗效的细胞模型,系膜细胞增殖及炎症介质的释放在肾脏疾病的发生、发展及肾小球硬化中具有重要作用[2]。临床上许多用于治疗肾脏疾病的药物都有抑制GMCs增殖的作用。葛根素是豆科植物野葛干燥根的提取物。在本实验中,葛根素能抑制GMCs的增殖,0.5mg/ml浓度葛根素与GMCs细胞共培养12h后,检测的GMCs增殖水平与对照组之间无显著性差异,但随着葛根素浓度的增加或是共培养时间增加,与对照组之间都存在显著性差异。表明葛根素呈浓度依赖性地抑制肾小球系膜细胞的增殖,提示葛根素可以通过抑制GMCs的增殖来保护肾脏,从而延缓纤维化肾病及肾小球硬化的发生、发展。 ......
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