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从皂浆废液中提取核苷酸


□ 肖 红 张熊禄 范小林

  核苷酸是生物体内重要的低分子化合物,具有许多生理功能。除作为DNA,RNA的前体,也作为生理生化过程的调节物质。核苷酸广泛应用在医药、食品、农药等领域。作为医药中间体,核苷酸主要用来制造腺苷三磷酸、环腺苷酸、胞二磷胆碱、聚肌胞等抗病毒,抗肿瘤,治疗心血管疾病的药物;作为食品添加剂,主要用作鲜味剂和配方奶粉中营养强化剂。正因为核苷酸独特的功效和作用,其应用范围越来越广,需求量也越来越大。
  提取核苷酸方法主要有以下几种:高效毛细管电泳技术、离子交换层析法、高效液相色谱法。本文用交换层析技术从皂浆废液(酵母碱性水解液)中提取核苷酸进行研究,获得了较好的结果。
  
  1 实验部分
  
  1.1主要仪器
  Cintra 10型紫外可见分光光度仪:澳大利亚GBS公司。UNIC-2102PCS型紫外可见光谱仪:CONIC上海仪器有限公司。所用试剂均为市售CP或AR。
  
  1.2实验
  1.2.1操作步骤
  (1)样品的处理 取一定量的皂浆废液,用2 mol/L氢氧化钠溶液调至pH值2以下,以4000 r/min的转速离心15 min,去上清液。
  (2)装柱
  用水浸泡717型阴离子交换树脂,并利用浮选法除去细小颗粒,使用时先用0.5 mol/L氢氧化钠溶液浸泡1 h,以除去碱溶性杂质,然后用无离子水洗至中性。再用l mol/L盐酸浸泡30 min。以除去酸溶性杂质,再用无离子水洗至中性。然后用1 mollL甲酸钠溶液浸泡,使树脂转变成甲酸型。
  取酸式滴定管,在柱底部铺一小块脱脂棉,防止树脂流出。将上述处理好的树脂悬浮液倒入管内,用l moi/L甲酸钠洗至无氯离子。再用无离子水洗至中性,慢慢放出液体,使液面与树脂表面刚好相平。树脂床高度为30 em左右。
  (3)加样
  从清液中取出10 mL样品。用2 mol/L氢氧化钠溶液调至pH值7。将样品小心地加到交换树脂上,待样品全部进入树脂后,用250 mL无离子水洗柱。以除去核苷、碱基等杂质。
  (4)洗脱
  用无离子水洗至在紫外分度计上波长260 nln处无光吸收(光吸收值低于0.020)后,依次用(a),250 mL 0.15 mol/L甲酸溶液;(b)250 mL 0.15 mol/L甲酸溶液;(c)250 mL pH4.44的甲酸,甲酸钠溶液;(d)250 mL pH值3.74的甲酸,甲酸钠溶液进行洗脱。用收集器收集流出液,控制速度为5。6 mL/15min。重复(2)、(4)的实验步骤,分别从pH值8、9、10、I1、12、13的样品液中提取核苷酸,记录数据。 ......
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摘自:化学世界
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