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大连刺参体腔液甘露糖结合凝集素序列的鉴定及分析


□ 谢广成,李丹彤,丁文勇,等

  谢广成1,李丹彤1,丁文勇2,刘 洋1,林 琳2,梁 莎3

  (1.大连海洋大学农业部海洋水产增养殖学与生物技术重点开放实验室,辽宁大连116023;2.大连医科大学生物化学教研室,辽宁大连116044;3.中国疾病预防控制中心病毒基因工程国家重点实验室病毒病预防控制所,北京100052)

  摘要:根据NCBI提交的刺参体腔液(Apostichopus japonicus)甘露糖结合凝集素(Mannan- binding lectins,MBLs)序列(AY625513)设计引物,抽取刺参体腔液进行总RNA提取,采用RT- PCR技术,获得498 bp目的片段。通过克隆、测序确定得到刺参MBLs序列。将得到序列进行核苷酸和氨基酸序列比对,鉴定了大连刺参MBLs序列,并为我国不同区域刺参的进一步分类提供了科学的分子水平依据。

  关键词:刺参;甘露糖结合凝集素;序列分析

  凝集素(Lectin)是动物细胞和植物细胞都能够合成和分泌的,能与糖结合的蛋白质,在细胞识别和粘着反应中起重要作用,主要是促进细胞间的粘着。凝集素具有一个以上同糖结合的位点,因此能够参与细胞识别和粘着,将不同的细胞联系起来。凝集素按糖的特异性、分子结构、结合位点和其功能进行分类。动物凝集素按分子结构分为C-型凝集素、S-凝集素、P-型凝集素、I-型凝集素和Pentraxins。MBLs属于C-型动物凝集素家族成员。关于脊椎动物MBLs的详细描述已有报道。

  我国的海参主要分为21个种类,刺参(Apostichopus japonicus)又名仿刺参,主要产于辽宁、山东、河北等北方海域,是我国最主要的经济种类。李丹彤等在2005年已经完成关于刺参体壁凝集素的生化性质研究。俄罗斯远东海洋研究所的Bulgakov进行了刺参甘露糖结合凝集素(MBL-AJ)的分子水平研究,我国也向NC-BI核酸数据库中提交刺参甘露糖凝集素序列,但未见相关文章报道。本研究以大连刺参为材料,进行大连刺参甘露糖结合凝集素分子水平研究,采用RT-PCR方法,得到了MBL-AJ序列并对序列进行分析,以期为MBL-AJ的进一步研究提供科学依据。

  1材料与方法

  1.1 样品采集

  新鲜活刺参采自大连黑石礁海域。实验室进行静养,每日更换新鲜海水,静养一周。

  1.2主要试剂

  Total RNA提取试剂RNAisoTMPlus、RT- PCR Kit、pMD-18T vector,胶回收试剂盒、小量质粒提取试剂盒、Eco.li DH5a感受态细胞均购自大连TAKARA公司,其他试剂为国产分析纯。

  1.3方法

  1. 3.1 刺参总RNA提取 用5 mL -次性注射器抽取刺参体腔液1 mL,加入l mL RNAisoT—MPlus,用移液枪反复吹打至裂解液中无明显沉淀,室温静置5 min,再按试剂盒提供的说明书进行总RNA提取。

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摘自:河北渔业
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