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通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的调节


□ 侯丽萍 周晓莉 田永峰 魏 玮 田 俊 郝建军

  摘要 目的:观察通络止痛胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清白细胞介素-1(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、空白模型组和治疗组(高剂量组、中剂量组、低剂量组),每组10只,用ELISE测定AA大鼠外周血细胞因子IL-1β、IL-6和放射免疫法测定TNF-α的表达情况。结果:与正常组相比,AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.01),通络止痛胶囊低、中、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著低于模型组,尤以高剂量组最显著(P<0.01)。结论:不同剂量的通络止痛胶囊均能够降低AA大鼠血中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,尤以高剂量作用显著,提示通络止痛胶囊可能通过降低IL-1β、IL-6和TNF-α,抑制AA大鼠骨与软骨的破坏,减轻滑膜炎症。
  关键词 佐剂性关节炎 IL-1β IL-6 TNF-α 通络止痛胶囊 大鼠
  
  类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜慢性炎症为特征的自身免疫性疾病,目前认为RA与自身免疫因素、遗传、感染、心理因素有关,其中炎性介质和细胞因子在RA的炎症及关节损伤中起关键性作用。我们临床应用通络止痛胶囊治疗RA,取得满意疗效,本实验通过观察该药对佐剂性关节炎大鼠白细胞介素-1(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,探讨中药复方防治佐剂性关节炎的作用机制,为临床立法组方提供药理学实验依据。
  1 材料
  1.1 动物:4~6周龄清洁级Wistar大鼠,体重200±20g,华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
  1.2 药品与试剂:通络止痛胶囊(山西正中药业生产,批号:20040626);完全弗氏佐剂(CFA,);IL-1β、IL-6(ELISE法)、TNF-α(放射免疫法)试剂盒及试验试剂均由深圳达科为生物技术有限公司提供。
  1.3 仪器:全自动酶标仪,3550型,美国BIO-RAD公司产品。TNF仪器:DFM-6型多管放射免疫计数器,合肥众成机电技术公司生产。
  2 方法
  2.1 佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型复制:依随机原则将50只Wistar大鼠分为正常对照组、空白模型组和治疗组(高剂量组、中剂量组、低剂量组),每组10只,适应性喂养1周后,空白模型组和治疗组采用完全弗氏佐剂0.1ml注射于大鼠左后足跖皮内。正常对照组于相同部位注射生理盐水0.1ml作为对照。
  2.2 给药方法:造模后第12天开始给药,通络止痛胶囊治疗组按高剂量组2g/kg、中剂量组1g/kg、低剂量组0.5g/kg给药,分每日2次给药,连续给药18天,其他两组予同体积生理盐水,用药期间常规饲养。
  2.3 检测方法:各组最后一次灌药2小时后眼球取血5ml,离心取上清液作为检测标本。IL-1β、IL-6采用双抗夹心ELISA法,具体操作按测试药盒说明书要求进行,于酶标仪450nm处读数。TNF-α的测定用放射免疫法,具体操作按测试药盒说明书要求进行。
  2.4 统计学处理:应用SPSS11.5软件对数据进行统计学处理与分析,各指标用均数±标准差(x±s)表示,两组治疗前后采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。
  3 结果与正常组相比,AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.01),通络止痛胶囊低、中、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著低于模型组,尤以高剂量组最显著(P<0.01)。血清IL-1β、IL-6、TNF-α检测结果见表1。
  
  4 讨论佐剂性关节炎动物模型是细菌学家Freund于上世纪50年代创立,又称福氏佐剂关节炎,造模多采用大鼠。研究表明,AA大鼠的关节组织病理学及血中变化改变与人RA类似[1-2];,且存在明显的免疫功能异常[3],是一种典型的免疫性炎症模型,是人类类风湿关节炎经典病理模型之一,适合于研究类风湿性关节炎的发病机制和评价抗关节炎药物的作用。该法成熟可靠,操作简便,被大量引用。本实验中,空白模型组和治疗组注射CFA2~3小时出现注射侧原发性肿胀;注射后第3天,大鼠出现急性炎症反应:活动不利,倦怠,进食减少,注射部位红、肿、痛;第11~15天开始出现全身广泛性炎症,多关节红、肿、痛,倦怠乏力加重,进食减少,足部活动明显受限。与文献报道相符,提示造模成功。
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