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大建中汤对脾阳虚大鼠血清神经递质影响的实验研究


□ 陈继婷 郭 维 杨 毅

  关键词 大建中汤 脾阳虚证 血清神经递质 实验研究
  
  大建中汤出自于《金匮要略·腹满寒疝宿食病脉证并治》篇中,是临床治疗脾胃虚寒证的有效方剂。方中蜀椒、干姜温中散寒,人参、饴糖补气缓中,共奏温中补虚、大建中气之功。目前国内对该方的研究,多局限于临床报道,国外对本方的动物实验也较少,所以本文在中医药理论指导下,用现代生物技术手段,从神经递质5-HT、5-HTP、5-HIAA的变化来研究大建中汤治疗脾阳虚腹痛的机理,为临床实践提供科学依据。
  
  1 材料与方法
  1.1 材料:分述如下。
  1.1.1 器材:哺乳类动物手术器械,高速低温冷冻离心仪、低温冰箱、电子秤、821-FP型HPLC、迪马C18柱、L-ECD-6A电化学检测器、取样钳、恒温水箱。
  1.1.2 药物:①造模用番泻叶水浸液:将番泻叶按1∶1比例与水混合,于恒温水浴箱中70℃浸泡24h,将浸得液3层纱布过滤后置4℃冰箱保存备用。②治疗用大建中汤:按比例(蜀椒∶干姜∶人参∶饴糖=1∶2∶1∶5)分别制成大(含生药1.5g/ml)、中(含生药0.75g/ml)、小(含生药0.375g/ml)剂量的三种浓度的水煎液。③治疗用消炎痛(四川省乐山第三制药厂生产)。
  1.1.3 试剂:5-HT、5-HTP、5-HIAA标准品均为Sigma公司产品,其余试剂均为国产分析纯。
  1.2 方法:分述如下。
  1.2.1 分组:将实验用清洁级健康SD大鼠60只雌雄各半,体重200±20g(第三军医学大学实验动物中心提供,合格证:医动字第310101015号),随机分为6组,即正常组,脾阳虚模型组,灌服大建中汤的大、中、小剂量组和消炎痛组,每组10只。
  1.2.2 造模:参照文献报道[1]的综合造模方法加以改进,具体如下:将大鼠正常饲养调整3d后开始造模。整个造模过程分为两大阶段(均自由饮水),共3w。第一阶段为前6d,饮食失节伤脾气——单日喂饲甘蓝10g,双日喂精炼猪脂2ml/只;劳倦过度伤脾气——每日38℃温水中游泳至疲劳(疲劳的标准为全身下沉至没颈,不能坚持游泳);第二阶段为第7~21天,除施加饮食失节及劳倦过度因素外,加上苦寒泻下伤脾阳——每日加灌100%番泻叶水浸液2ml/只。正常组予正常饮食。
  1.2.3 给药:造模结束后第2d,分别给予相应汤剂灌服7d,处死前3d行同样处理后除正常组外,皆给予20%冰醋酸10μg/只腹腔注射。
  1.2.4 制备血清样品:股静脉取血,血液滴入Ependet管中,4℃分离血清,等比吸取血清与10%三氯乙酸混合,漩涡混旋后,于低温高速离心仪中16000r/min离心10min,吸取上清液进样检测。
  1.2.5 测定条件:色谱柱:迪马C18柱(10μm,250mm×46mm),流动相:0.1mol/L,乙酸钠(含0.11mmol/L EDTANa)∶甲醇=9∶1,乙酸调PH=4.5,柱温:室温,流速:1ml/min,电压:+0.6mv,检测器:电化学检测器(L-ECD-6A)。
  1.2.6 标准曲线的制作:分别精密秤取5-HT、5-HTP、5-HIAA标准品各5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg,用0.1MHCL。分别定溶至10ml,从三种标准品的相同质量溶液中分别再取10μl进样。以吸收峰值面积和含量(μg)做线形回归,求得标准曲线方程分别为:5-HT:y=0.0366+0.6606x,r=0.996;5-HIAA:y=0.138+0.796x,r=0.996;5-HTP:y=0.146+1.206x,r=0.996。
  
  2 结果
  2.1 实验结果:见表1。
  
  2.2 结果分析:大建中汤大、中、小剂量组与模型组比较有显著性差异,能显著降低脾阳虚大鼠血清中5-HT、5-HTP、5-HIAA含量,大、中、小剂量组之间有量效关系,大建中汤大剂量组与消炎痛组之间的疗效比较无显著差异。结果提示:大建中汤能够降低血浆中与疼痛刺激相关的神经递质5-HT、5-HTP、5-HIAA含量,从而达到镇痛作用。
  
  3 讨论
  脾阳虚腹痛可以有许多因素参与。可能由胃肠道平滑肌瘁挛导致疼痛,也可能由其他因素导致,特别是一些化学介质(细胞坏死因子、白介素、肿瘤坏死因子、组织胺、五羟色胺、一氧化氮、前列腺素等)的参与,在疼痛的发生和调节过程中有相当重要的作用。5-HT在周围组织中是由血小板和肥大细胞释放,并经5-HT3受体激活感觉神经元,产生疼痛。通过5-HT1受体和5-HT2受体5-HT也可以使伤害感受器致敏。在5-HT的代谢过程中5-HTP、5-HIAA分别是5-HT的底物和代谢产物。此二者的含量也可以反映5-HT的含量。因此我们采取高效液相色谱仪测定血清中5-HT及其底物和代谢产物的含量,从而阐明大建中汤治疗脾阳虚腹痛的机理。
  
  4 参考文献
  [1]陈学习,陈继婷,翟信长.大建中汤对脾阳虚大鼠TXB-2及6-Keto-PGF(1α)的影响[J].江苏中医药,2003,24(2):49-50.
  收稿日期 2006-07-05
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