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血管紧张素转化酶基因ACE(I/D)多态性与缺血性脑卒中中医证候相关性分析


□ 涂晋文 董梦久 邵 卫 黄 蓓

  摘要 目的:探讨血管紧张素转化酶基因ACE(I/D)多态性与缺血性脑卒中患病及中医证候的关系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)筛查382例脑梗死患者和200例健康对照组的血管紧张素转化酶基因ACE(I/D)多态性分布,探讨不同基因型与缺血性脑卒中患病及不同中医证候的关系。结果:脑梗死组DD、DI、II基因型分别为167、93、122例;健康对照组分别为42、75、83例;脑梗死组DD基因型显著高于健康对照组(χ2=4.42,P<0.05)。D等位基因频率分布在脑梗死组与健康对照组分别为0.56、0.39,脑梗死组D等位基因频率明显高于健康对照组(χ2=4.37,P<0.05)。风痰瘀血、痹阻脉络证脑梗死患者DD、DI、II基因型分别为96、32、109例;肝阳暴亢、风火上扰证脑梗死患者DD、DI、II基因型分别为71、61、13例。两个证型与健康对照组比较,风痰瘀血、痹阻脉络证患者DD基因型比健康对照组显著增多(χ2=4.71,P<0.05),而DI、II基因型与健康对照组无显著性差异。肝阳暴亢、风火上扰证患者DD基因型与D等位基因频率均显著高于健康对照组(χ2=6.71、5.17,P<0.01)。结论:ACE-DD基因型或D等位基因是脑梗死的遗传易感因素,可能在脑梗死发生中起作用。ACE-DD基因型或D等位基因与脑梗死肝阳暴亢、风火上扰证密切相关,可能是该证候的遗传易感因素。脑梗死组患者DD基因型患者血浆血管紧张素AngⅡ水平显著增高,且肝阳暴亢、风火上扰证患者增高更显著。DD基因型导致血浆AngⅡ水平增高可能是中医肝阳暴亢、风火上扰证诊断的遗传易感因素。
  关键词 脑卒中 缺血性 中医证候 血管紧张素转化酶 基因多态性
  
  肾素—血管紧张素系统是参与体内血压调节的重要系统,而血管紧张素转化酶(ACE)是该系统中的关键酶之一。ACE基因的遗传变异影响体内ACE水平,国内外学者对ACE基因多态性与高血压、脑梗死三者间的关系进行了深入研究,结果却差异较大。为进一步探讨ACE基因在脑梗死发生发展中的遗传机制,对脑梗死患者ACE基因插入/缺失多态性与血浆血管紧张素(angiotensin,Ang)水平以及与缺血性中风中医证候相关性的关系进行分析,我们利用聚合酶链反应(PCR)技术对武汉地区382例缺血性脑卒中患者及200例健康对照人群的ACE基因I/D多态性进行了检测和分析。
  
  1 资料与方法
  
  1.1 研究对象:在湖北省中医院神经内科、武汉市第一医院神经内科、武汉大学附属中南医院共收集符合纳入标准脑梗死患者382例;健康对照组200例。脑梗死组:男性206例,女性176例;平均年龄为67.8岁±13.1岁,40~49岁46例,50~59岁89例,60~69岁137例,70~79岁110例;病史中有高血压病者219例,风湿性心脏病者34例,冠心病者98例,糖尿病者113例,高脂血症206例,吸烟者134例,饮酒者78例,有脑血管病高危因素家族史261例;中医证候分类:风痰瘀血、痹阻脉络证237例,肝阳暴亢、风火上扰证145例。健康对照组:男性107例,女性93例;平均年龄为63.7岁±14.5岁,40~49岁24例,50~59岁58例,60~69岁87例,70~79岁31例;病史中无高血压、冠心病、脑梗死等心脑血管疾病,身体各系统未发现重大疾病,吸烟者51例,饮酒者37例,有脑血管病高危因素家族史84例。
  1.2 方法:分述如下。
  1.2.1 基因PCR-RFLP分析:①基因组DNA应用DNA提取试剂盒从人血白细胞中提取。②参照文献[1]设计引物。PCR核苷酸引物P1:5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3',P2:5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。引物合成由上海生工工程技术服务有限公司完成。③目的DNA片段PCR扩增:PCR反应体系为50ul,常规配制,置于PCR扩增仪,94℃预变性5min,94℃变性1min,58℃退火1min,72℃延伸2min,循环35周期,72℃延伸10min后终止扩增。循环完毕,取出反应物。PCR产物在含0.5g/L溴化乙锭的12.0g/L琼脂糖凝胶内电泳,通过凝胶成像系统判定结果。剩余扩增产物置于4℃冰箱保存。
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