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温化痰湿法对实验性抑郁大鼠脑内氧自由基的影响


□ 谢海芳 侯公林

  摘要 目的:研究中医温化痰湿法对实验性抑郁大鼠脑内氧自由基损伤的作用。方法:将40只SD大鼠随机分为中药组、西药组、模型组和空白组,十味温胆汤为中药干预,西药百优解为对照,观察其对采用孤养与慢性轻度不可预见性应激(CUMS)相结合造成的抑郁大鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)、超氧歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果:十味温胆汤能明显抑制抑郁模型大鼠脑内NOS活性,降低MDA含量,各组大鼠脑内SOD活性变化无统计学意义。结论:温化痰湿法具有一定的对抗造成实验性抑郁大鼠脑组织中自由基损伤的作用。
  
  关键词 大鼠抑郁模型 温化痰湿法 一氧化氮合酶 丙二醛 超氧歧化酶
  
  抑郁症是以情感性心境障碍为主要临床表现的心理疾病,其发病机理非常复杂,已有的关于抑郁症的理论包括5-羟色胺学说、多巴胺学说等多个方面。近年来,大量研究表明氧自由基和一氧化氮(NO)可能在神经精神疾病的发病病理过程中起着重要的作用[1]。因此,自由基学说逐渐地引起了人们的重视。抑郁症在中医学属于“郁证”的范畴,痰湿致病是其重要的发病机制。南宋陈无择在《三因极一病证方论》就提出:“七情扰乱,郁而生痰”,指出了痰湿在抑郁症的发病过程中的重要意义。本文采用十味温胆汤作为温化痰湿法的治疗方剂,对造成实验性抑郁的大鼠进行了干预,观察温化痰湿法能够对大鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)、超氧歧化酶活性及丙二醛(MDA)含量产生的影响。現报道如下。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 动物:6周龄健康SD雄性大鼠,40只,清洁级,体重200±10g,由浙江中医学院实验动物中心提供。
  
  1.2 药品与试剂:中药十味温胆汤由人参、酸枣仁、远志、五味子、熟地黄各3g,半夏、枳实、陈皮各9g,白茯苓5g,粉甘草2g组成。水煎,浓缩成生药含量1g/ml的水剂置4℃冰箱备用。盐酸氟西汀(百优解)生产厂:Eli lilly and company Limited;分装厂:礼来苏州制药有限公司分装厂分装,批号:H20050463;生理盐水,浙江沙普爱思制药有限公司,国药准字:H33021037。将盐酸氟西汀粉剂溶解于生理盐水中,按含药量1mg/ml配制成水剂备用。蛋白标准液0.615g/ml;考马斯亮兰蛋白测定试剂盒,批号20070123;一氧化氮合酶(NOS)分型测定试剂盒,批号20070120;丙二醛(MDA)测定试剂盒,批号20070124;超氧化歧化酶(SOD)测定试剂盒批号,20070123;均购自南京建成生物工程研究所。
  
  1.3 主要仪器及设备:FA25型号实验室高剪分散乳化机,上海弗鲁克机电设备有限公司;723P型可见光分光光度计,上海光谱仪器有限公司;Avanti J-E型Beckman高速离心机,美国Beckman Coulter。
  
  1.4 分组及给药方法:大鼠饲养1周,自由进食饮水以适应环境,实验人员每日触摸动物使其适应操作。所有大鼠随机分为空白组、中药组、西药组、模型组,每组10只。中药组在每天刺激前分别灌“十味温胆汤”浓缩液,按5g/kg体重计算,每只约1ml/天;西药组灌西药盐酸氟西汀(百优解)混悬液,按4mg/kg体重计算,每只约1ml/天;模型组灌0.9%生理盐水,按4ml/kg体重计算,每只约1ml/天。空白组不进行任何干预。实验时间为21天。
  
  1.5 造模方法:参照Willner等[2]的方法,并加以改进,采用孤养抑郁模型与慢性轻度不可预见性应激抑郁模型相结合制作实验性抑郁动物模型。空白组大鼠分两笼,5只/笼群养,自然光照,自由饮食。中、西药物组与模型组大鼠施行孤养,1只/笼饲养,分别接受21天各种不同的慢性轻度不可预见的应激刺激,包括①电击足底,36V交流电,电流强度1.0mA,每隔1分钟刺激1次,每次持续10秒,共30次;②冰水游泳,4℃冰水,5分钟;③潮湿垫料,在需要刺激的动物笼中分别加入100~300ml水,使笼中所垫纸屑足够潮湿,每次24小时;④夹尾,用书夹夹住大鼠尾巴后1/3大鼠比较敏感的部位,每次1分钟;⑤禁水24小时;⑥禁食24小时;⑦昼夜颠倒,保持昼夜颠倒各12小时等应激刺激。以上刺激每日1种,同种刺激随机分配,但不能连续出现,并且每种刺激在每一轮出现的次序不能相同,使动物不能预料到下一种刺激的发生。每天在灌胃结束半小时后进行刺激。
  
  1.6 取材及NOS、SOD、MDA测定方法:造模结束后,次日上午8时称取体重后,3%戊巴比妥钠(100mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,解剖大鼠,冰上打开颅腔取大脑组织约500mg,在4℃冰冷生理盐水中漂洗,滤纸吸干,称重,再加入生理盐水,用实验室高剪分散乳化机匀浆,制备成10%的组织匀浆,4℃低温离心机5000转/min,离心10min,用枪头取上清置于4℃冰箱中保存,用考马斯亮蓝法测定脑蛋白含量,采用硝酸还原酶法检测NOS活性、黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性和TBA比色法检测MDA含量。
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