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霍山石斛组培培养基筛选


□ 刘建美

  

  (福建省林业科技试验中心,福建南靖363600)

  摘要:通过不同基本培养基和不同激素及不同浓度对霍山石斛组培各阶段的影响研究,筛选出霍山石斛组培各阶段的最佳组培配方。试验研究结果表明:霍山石斛初代培养的最佳培养基为1/2MS+6-BA0.6mg/L+ NAA0.4mg/L,继代增殖最佳培养基MS+6-BA1.6mg/L+ KT1.5mg/L+ NAA0.3mg/L,生根最佳培养基1/2MS+NAA 0.3mg/L+IBA 1.0mg/L+AC 1.5mg/L。

  关键词:霍山石斛;培养基;筛选

  霍山石斛别名米斛、龙头凤尾草,是兰科石斛属中珍稀药用与观赏草本植物之一,主产于我国安微省霍山县,最早见载于清代赵学敏《本草钢目拾遗》[1-2]。其生长条件极为苛刻,喜阴凉、湿润、通风多雾的小气候,该植物在我国秦岭、淮河以南的云、贵、浙、皖等地海拔较高山区也有分布,常生于山地林中树干上和山谷岩石上[3]。据本草纲目记载,霍山石斛具有“强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、平胃气、益智除惊、轻身延年”等功效,广泛应用于医学产业。1987年国务院将霍山石斛列为重点保护药材之一。因霍山石斛生长条件的特殊性与分布局限性,又受长期人工挖采,自然资源面临枯竭,国内市场供需紧缺,国际市场价格攀升,均在1000元/kg以上。

  为做好霍山石斛的保护与利用工作,近年来全国许多地方相继对其开展组培快繁技术研究,也取得一定技术突破,其研究成果诸见报导[4-6],但目前仍存在着组培苗增殖倍数、试管小苗生根率低而致大田移植成活困难等问题。鉴于此,作者选择腋芽为外植体,筛选出霍山石斛组培各阶段的最佳组培配方,以便为霍山石斛的工厂化产业化培育提供参考。

  1 材料与方法

  1.1 试验材料

  2010 年从云南引进优良健壮的植株作为组培快繁材料,组织培养于福建省林业科技试验中心组培实验室。

  1.2 方法

  1.2.1 外植体剪切和消毒处理。从健壮植株上剪取腋芽饱满、茎段丰润、节间较短的中上部枝条作为外植体,保留叶柄、长度约10cm,用细毛刷轻刷洗净附于茎枝上的细绒毛和其它粘着物,放在自来水流动冲洗2~3min,然后放至接种室超净工作台上,用75%酒精消毒10s,再转入0.15%升汞溶液中消毒10min,用无菌水冲洗5遍,置于经高温消毒过滤纸上沥干水后,将枝条切割为1.0~1.5cm 长的茎段,每个茎段至少带1个腋芽。

  1.2.2 诱导培养基筛选。以1/2MS、White 和B5为基本培养基,添加不同的激素(6-BA、NAA),采用4 因素3水平(见表1)的正交设计L9(34),共9 个处理,每瓶1个,每处理20瓶,重复3 次,调查统计平均不定芽数、平均萌芽率,再通过方差分析进行显著性检验,最终筛选出最佳的培养基配方。

  霍山石斛组培培养基筛选图片1

  1.2.3 继代增殖培养基筛选。以MS、1/2MS、White和B5为基本培养基,添加不同的激素(6-BA、KT、NAA),采用5因素4水平(见表2)的正交设计的L16(45),共16个处理,每个茎段带1个新腋芽,每瓶1个,每处理20瓶,重复3次,调查统计其平均增殖倍数,再通过方差分析进行显著性检验。

  霍山石斛组培培养基筛选图片2

  1.2.4 生根培养基筛选。以1/2MS固体培养基为基础,添加不同的生长调节剂(NAA、IBA)和防褐变、防玻璃化且有利于生根的物质(AC),采用4 因素3 水平(见表3)的正交设计L9(34),共9个处理,把霍山石斛继代小苗(苗高1.0~1.2cm带2 片小叶)接种于不同处理的培养基上,每处理30瓶,每瓶接20株小苗,重复3次,调查统计每瓶平均生根数、平均生根率,分析比较不同配方组合处理的生根效果,以筛选出最佳的生根培养基配方。

  霍山石斛组培培养基筛选图片3

  1.3 培养条件

  在霍山石斛诱导阶段、继代增殖培养、试管小苗生根培养等试验时,外植体接种后,均进行7天暗光培养处理,之后将其置于光照时间为12h/d、温度(25+2)℃、光照强度1500~2000Lux的条件下培养。诱导(初代)培养、继代培养糖用量为30g/L,生根培养糖用量为20g/L,琼脂粉7g/L。

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